El método de centrifugación de gradiente de densidad también se llama centrifugación de Zona.

De este métodoventajaSe puede separar varios o todos los componentes de la muestra al mismo tiempo, con una buena resolución y un buen efecto de separación, y se pueden obtener componentes más puros a la vez.

DeficienciasEs que el tiempo de centrifugación es más largo, es necesario preparar líquido gradiente y los requisitos de operación son altos.

De acuerdo con el principio de separación centrífuga, la centrifugación de gradiente de densidad se puede dividir enMétodo de centrifugación de la zona de velocidad(método de centrifugación zonal, R-Z) 和Método de centrifugación de densidad constante (Método de centrifugación isopícnica).

La centrifugación de la zona de velocidad también se puede llamar centrifugación de densidad de la zona igual, que consiste en separar y purificar las muestras mixtas por centrifugación de acuerdo con los diferentes tamaños de volumen y diferentes coeficientes de sedimentación de las partículas de los diferentes componentes de la muestra.

Al centrifugar, la solución de muestra que debe separarse se se coloca sobre una columna de líquido gradiente formada por materiales de gradiente de densidad (como sacarosa, cloruro de cesio (csci), * etc.), y la densidad de las partículas de la muestra debe ser mayor que la densidad de cualquier punto de la columna de líquido gradiente, de lo contrario no se puede obtener El efecto centrífuga de zona ideal. En el momento de la centrifugación, los diferentes componentes de la muestra mixta formarán sus respectivas zonas en diferentes posiciones de la columna de líquido gradiente, seleccionarán la velocidad y el tiempo adecuados para la centrifugación, y cuando la distancia entre las zonas de cada grupo se tire lejos, terminarán la centrifugación y luego se retirará la Zona.De esta manera, los componentes de la muestra mixta se pueden separar y purificar a través de una sola centrifugación, y su pureza y recuperación pueden cumplir con los requisitos.

ventajaSe trata de una separación y purificación, el método se puede seleccionar si el coeficiente de sedimentación de los componentes es diferente en más del 20%, con alta resolución, y la operación hábil puede separar bien las muestras con una diferencia del coeficiente de sedimentación de los componentes del 5% al 10%.

DeficienciasEs la restricción de las condiciones del material, la concentración de la muestra no puede ser demasiado alta, de lo contrario las condiciones de operación son difíciles de controlar, mientras que este método trata la muestra en una cantidad mucho menor que el método de centrifugación diferencial.

Figura 1 centrifugación de la zona de velocidad

El tiempo de centrifugación de la zona de velocidad debe controlarse estrictamente y no debe ser demasiado corto, de lo contrario la zona de muestra no puede ser clara y el tiempo no debe ser demasiado largo, de lo contrario los componentes a separar pueden hundirse en el fondo. La velocidad de sedimentación de las partículas de la muestra que deben separarse depende de factores como la forma, el tamaño, la densidad y la fuerza centrífuga de las partículas. El Estado de las muestras antes y después de la centrifugación se muestra en la figura 1.

La aplicación clásica de la centrifugación de banda de velocidad es la purificación de varios subcitos (ribosomas, mitocondrias, exosome, etc.) y partículas virales (vectores virales, vacunas, etc.) a través de la centrifugación de gradiente de densidad de sacarosa. Por ejemplo, la precipitación del ribosoma 70s que obtuvimos en la fase anterior, después de la degradación, puede utilizar la centrifugación del gradiente de densidad de sacarosa para separar y purificar aún más las dos subunidades 50s y 30s. El proceso experimental específico es el siguiente:

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* Fecha de revisión: 2020 / 10 / 16

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